相差观察（Phase contrast），是一种利用被检物体的光程之差进行镜检的技术，它的核心原理在于有效地利用光的干涉现象，将人眼不可分辨的相位差变为可分辨的振幅差，从而使得无色透明的物质也能清晰可见。

相差显微镜利用被检物体的光程差异进行镜检，其关键在于巧妙地利用光的干涉现象，将原本人眼无法分辨的相位差转化为可观察的振幅差，从而使得原本无色透明的物质也能在显微镜下清晰可见。这一特性使得相差显微镜在观察活体细胞时具有显著优势，因此相差观察法广泛应用于倒置显微镜中。

相差显微镜的基本原理在于，通过特定的光学设计，将透过标本的光线产生的光程差转化为振幅差，从而显著提高显微图像中不同结构间的对比度，使得各种细节得以清晰展现。当光线透过标本时，由于标本内部的折射率变化，光线会发生折射，导致光程发生改变。通过相差显微镜的特殊设计，这些光程差异被转化为振幅差异，使得原本难以分辨的结构变得清晰可见。在相差显微镜的构造中，有四个与普通光学显微镜显著不同的特殊之处：

1、环形光阑位于光源与聚光器之间，其作用在于使透过聚光器的光线形成空心光锥，聚焦于标本上。这一设计有助于减少光线的散射，提高成像质量。

2、相位板是相差显微镜的另一个关键部件，它位于物镜中，涂有氟化镁等特殊材料。相位板的作用是将直射光或衍射光的相位推迟1/4λ，从而与未经过相位改变的光线产生干涉效应，增强图像的对比度。

3、A+相板是相位板的一种类型，它主要将直射光推迟1/4λ。当两组光波合轴后，由于相位差异，光波相加导致振幅加大，使得标本结构相对于周围介质更加明亮，形成亮反差（或称负反差）。

4、B+相板是另一种相位板类型，它主要将衍射光推迟1/4λ。当两组光线合轴后，由于相位差异，光波相减导致振幅变小，使得标本结构相对于周围介质更加暗淡，形成暗反差（或称正反差）。

此外，相差显微镜的应用领域非常广泛。在生物学和医学研究中，它可用于观察细胞内部的亚细胞结构，如细胞核、线粒体等，从而帮助科研人员研究细胞生理、病理以及疾病的发生机制。在材料科学领域，它可用于观察和分析纳米颗粒的形状、大小以及分布等特征，以及材料的表面形貌和内部结构。在医学领域，医生通过相差显微镜观察组织切片，可以更准确地判断细胞形态的变化，从而帮助诊断疾病和制定治疗方案。

综上所述，对于暗场观察其

优点：鉴定活体细胞最实用、最经济的方法。

缺点：需要光强高；

切片不能太厚(5~10um);

盖片、载片需符合标准；

相差荧光物镜的荧光成像效果较明场荧光物镜差。

应用：可对无色透明的标本进行观察，尤其适于培养的活细胞、组织观察，也适用于细菌、血液、水生无脊椎动物等。