【基础知识】何为荧光显微镜 2019-02-03

荧光显微镜是具备荧光照明系统的一种显微镜,观察标本的荧光信号。通常使用能量较高(波长较短)的激发光去激发荧光团产生波长较长(能量较低)的荧光信号。如:UV激发光可以激发出蓝色甚至绿色黄色的信号,蓝色激发光可以激发出绿色甚至红色的信号,绿色激发光可以激发出红色和红外信号......

荧光显微镜在显微镜体系中的分类

1、按照光学系统划分,显微镜可以分为复式光学显微镜和体视光学显微镜两大类

2、其中,复式光学显微镜包含所有:正置、倒置显微镜

3、正置和倒置显微镜有如下照明方式和观察方式:明场(BF)、暗场(DF)、相差(PH)、荧光(FL)、微分干涉(DIC),有时人们讲其功能性名称直接作为名字,严格的来说,是不准确的称呼。

荧光显微镜的组成部件

目镜、观察筒、荧光臂(荧光装置、荧光模块)

1、目镜:10X宽视野目镜是主流配置,视野数通常20或22,高级显微镜目镜视野数可达25或26.5。

2、观察筒:是目镜成像的主体,置于机身光路上方,可分为双目观察筒和三目观察筒,三目观察筒可以连接摄像接口与相机连接。。

3、摄像接口:各不同品牌的摄像接口结构各不相同,但用途都是一样的,将观察筒的光斑成像到摄像头的传感器靶面上,与显微镜观察筒连接的尺寸通常是非标尺寸,各家互不通用,与摄像头连接的尺寸,一般遵循国际标准C接口。

4、荧光臂(荧光装置、荧光模块):是给显微镜提供反射荧光照明的装置,里面装有激发块,可切换不同的波长颜色。。

物镜、载物台、切片夹

5、物镜:现行显微镜物镜(Objective)主要以蔡司、徕卡、尼康和奥林巴斯四大厂家为标准,尼康物镜以其独特的60mm齐焦距离独树一帜,其它三家均为45mm齐焦距离。尼康和奥林巴斯的光学系统为独立消色差系统,物镜色差可以不依赖于管镜(tube lens)和目镜(eyepiece)。主流倍率为:1.25x、2x、4x、5x、10x、20x、30x、40x、50x、60x、63x、100x、150x。主要级别分为:平场消色差物镜、半复消色差物镜、复消色差物镜。

6、载物台:可分为机械手动平台和电动平台(程序化控制,可以用于扫描、高通量、高内涵)

7、切片夹:可分为单片、双片、多片

激发块和滤光片

滤光片是荧光显微镜中最重要的部件之一,其主要功能是负责提供精准的激发波长(EX)和发射光(EM)高效的截止。行业知名品牌的滤片有SEMROCK、CHROMA、OHA-RAIF,顶尖品牌多采用磁控离子溅射技术来制造镜片的镀膜,其镀膜硬度与玻璃材质相当,不易受温湿度变化而退化。

不同品牌的激发块也大不相同,如奥林巴斯U-FF可适用于BX3系列机身,徕卡K系列可用于DM2500和DM3000等机身。

摄像头及摄像接口

摄像接口是用于将摄像头和显微镜进行连接的光学部件,其中包含了复杂的光学设计和加工工艺,优质的摄像接口是获得高质量图像的前提,MTF曲线以及宽带增透膜参数通常不易量化对比,只有倍率可以参考,给各种山寨三无产品以可乘之机,使用户获取图像时形成隐形瓶颈(一般用户难以察觉问题所在)。建议用户选择摄像接口尽量选择原厂和大品牌正规产品,质量才有所保障。


摄像头

显微镜摄像头是针对显微镜光源以及显微镜光路进行优化设计的一种高性能摄像头,可以分为科研级别、实验室级别、工业级别、教学级别。

科研级别的有EMCCD、sCMOS、CCD,主要追求的是高灵敏度和极低噪声,用于双光子、单光子实验。工业级别的通常是CCD和CMOS为主,主要追求高可靠性、稳定性和传输速度。实验室级别和教学级别通常以CMOS较为常见,对图像色彩和清晰度有一定要求。

常规激发块滤光片参数指标

DAPI:N021120

Spectrum

Single Band Exciter: 340-380nm

Single Band Emitter: 420-470nm

Dichroic: 400nm




FITC:N021121

Spectrum

Single Band Exciter: 455-495nm

Single Band Emitter: 505-555nm

Dichroic: 500nm




TsRED: N021122

Spectrum

Single Band Exciter: 545-575nm

Single Band Emitter: 595-665nm

Dichroic: 585nm


Filter Size

Single Band Exciter: Dia.25 X 5mm

Single Band Emitter: Dia.25 X 3.5mm

Dichroic: 25.2 x 35.7 x 1.1 mm



信息咨询:

如果无法找到您需要的产品或信息,请与我们联系 order@mayduly.com.